Biología Molecular y Celular - Sarampión- Bacteroides fragilis: julio 2021

Ácidos nucléicos recombinantes en la naturaleza - ADN recombinante artificial

Un ejemplo de ácidos nucléicos recombinantes en la naturaleza se presenta en la ADN baculoviral en el que este virus ingresa a las célula huésped de insectos y también en los mamíferos mediante la glicoproteína de su envoltura, GP64 y así producir proteínas recombinantes en la célula huésped. (1)

En la enfermedad por infección de Bacteroides Fragilis, un ejemplo de ADN recombinante artificial se presenta en la clonación del gen agaBf 3S, un ADN de 1521 pb que codifica 506 aminoácidos, de Bacteroides fragilis NCTC9343 mediante PCR y expresado heterogéneamente en Escherichia coli LMG194. (2)

Tema: Síntesis eficiente y regioselectiva de globotriosa por una nueva α-galactosidasa de Bacteroides fragilis

Objetivos:

-La síntesis enzimática de globotriosa necesaria para el desarrollo de terapias basadas en carbohidratos para infecciones bacterianas y cánceres.

Gen o secuencia a clonar: agaBf 3S

Enzimas de restricción: Nhe I y Xho I

Enzima ligasa: ligasa T4

Vector: pBAD / His A

Célula receptora: procariota Eschericia coli LMG194.

Mecanismo de transferencia o inserción del gen: Transformación por Conjugación bacteriana

Métodos de identificación de clones: Cultivo, Reacción en cadena de polimerasa (PCR)

(2)

Bibliografía

1. https://www.mdpi.com/1999-4915/10/9/510

2. https://link.springer.com/content/pdf/10.1007/s00253-016-7464-1.pdf

Técnica de Hibridación en el Sarampión

Southern Blot

Es una técnica de hibridación de alta especificidad y reproducibilidad ya que permite la valoración del estado físico del ADN, y así poder valorar si el ADN viral está integrado en el genoma del huésped o permanece como episoma en el huésped, para esto se confirma la reacción específica del virus del Sarampión mediante hibridación Southern blot utilizando Oligonucleótido MVO4 marcado con digoxigenina para los productos de PCR del gen de la proteína M y MVNP3 para los productos de PCR del primer paso del gen de la proteína N del Sarampión. Esta aplicación mencionada se ha realizado en investigaciones para confirmar la presencia del virus del sarampión en focos de otosclerosis estapedial.

Bibliografía

https://journals.asm.org/doi/epdf/10.1128/JCM.38.7.2655-2660.2000

Tema: Prueba PCR en el Sarampión

Objetivos:

-Control del sarampión en la caracterización genética de los virus salvajes causantes

-Detección de variación genómica en diferentes momentos y regiones del mundo ya que puede detectar partículas virales inactivadas.

Tipo de muestra biológica: El examen se puede realizar a partir de muestras de sangre, garganta, nariz, nasofaringe u orina.

Tipo de ácido nucleico a ser extraído: ARN viral

Gen o secuencia a amplificar: Gen blanco que codifica una de las 6 proteínas estructurales del virus de sarampión para la nucleoproteína (N)

Tipo de PCR: La prueba PCR para el diagnóstico del Sarampión se basa en la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción reversa (RT- PCR)

Visualización: RT-PCR en tiempo real

Bibliografía:

https://www.hkmj.org/system/files/hkmj187470.pdf

Fuente de imágen: https://www.tododiagnostico.com/enfermedades-infecciosas/vigilancia-epidemiologica-del-sarampion/

Alteraciones de la Epigenómica en el Sarampión

El Sarampión causará alteraciones en la epigenómica de las células que infecte ya que el virus del sarampión se replica en el epitelio de las vías respiratorias y las células resultaran alteradas o destruidas y causando la formación de cuerpos de inclusión en el núcleo y el citoplasma. Produce alteraciones en el lecho capilar causando así lesiones exantemáticas ya que cuando el virus llega a cualquier tejido produce una reacción mononuclear con focos inflamatorios distribuidos por todo el organismos y dentro de estos focos se forman células gigantes multinucleadas con cuerpos de inclusión intranucleares e intracitoplasmáticos. En el sistema nervioso central se puede presentar una encefalitis sarampiosa caracterizada por edema congestivo y hemorragias petequiales difusas con un grave ataque a las células neuronales causando estados degenerativos. También infecta a los linfocitos T y B, monocitos, leucocitos y polimorfonucleares, depresión de la inmunidad celular, disminución en la producción de interleucina 12 de monocitos y macrófagos y sobre los linfocitos B suprime la síntesis de inmunoglobulinas (Ig) y la actividad de las células citolíticas naturales.

El genoma de los virus salvajes del sarampión es una molécula de RNA de 15.984 nucleótidos, codifica por las proteínas estructurales: N (nucleocápsida), P (fosfoproteína), L (polimerasa), M (matriz), H (hemaglutinina) y F (de fusión) que se incorporan a las partículas víricas, y otras no estructurales V y C que se encuentran solamente en las células infectadas.